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          1. 豬場非洲豬瘟病毒檢測樣本采樣方法
            發布時間:2020/3/12 16:00:07 發布者:新牧網

              監測是防控動物疫病的基礎,是制定防控建設的一級依據。當前非洲豬瘟疫情嚴峻,通過進行豬場環境的監測,可以及時發現非洲豬瘟疫情隱患,有效切斷病原傳播途徑,為非洲豬瘟防控決策提供科學依據。

              非洲豬瘟病毒,具有龐大而復雜的基因組,擁有超強的體外生存能力,雖然宿主單一,只感染豬和野豬,但傳播源和傳播途徑都十分復雜。因為非洲豬瘟病毒的這些特點,導致非洲豬瘟的防控工作實施難度大。

              能否在感染之前,及時地把非洲豬瘟病毒“揪”出來,是能否有效避免非洲豬瘟病毒侵害的關鍵之一。在復產方面,豬場能否成功,清場后是否做到全面凈化非洲豬瘟病毒,必須通過全面的環境監測來驗證。

              2019年4月,農業農村部發布《關于加強養殖環節非洲豬瘟疫情排查的通知》,鼓勵規模豬場和種豬場開展非洲豬瘟自檢,熒光定量PCR檢測是可以替代病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速的ASFV檢測技術,被認為是ASFV核酸檢測的金標準,被用在OIE所有的區域性參考實驗室。不少規模豬場開始自我配備相應設備開始自檢,但很多人對如何有效采集檢測樣本比較疑惑,今天小編為大家簡單介紹一下:

              一、血液采樣

              使用含有抗凝血劑(EDTA)的無菌管(真空采血管)從頸靜脈、下腔靜脈或耳靜脈抽取全血。如果動物已經死亡,可以從心臟中采血,但必須立即進行。避免使用肝素(綠色蓋子),因為其可以抑制PCR反應(造成假陰性),和/或由于紅細胞吸附試驗(HAD)造成假陽性的產生。但采集血液要求豬場技術人員能熟練操作,否則易造成豬流血污染,導致病毒擴散,所以不建議豬場頻繁采血檢測;

              二、唾液采樣

              在正常生產情況下,病毒可能在1~2個月前就出現在唾液中了。因此,與血液檢測相比,通過唾液檢測,能夠較早地發現豬只是否感染了病毒。不僅如此,豬只感染ASFV后,首先出現在口腔中,時間可能長達2~3個月?!翱谇粌染植扛腥倦A段是非洲豬瘟窗口期檢測的重要時機,此時尚未形成病毒血癥,積極采取措施能有效防控病毒爆發及擴散。唾液采集要求:

              1、采集的唾液樣本要求清亮、透明并不得含有食物殘渣,故采樣之前的停食至關重要,原則上要求停食 12 小時以上;

              2、唾液中含有豐富的具備活性的酶。機體健康狀態不同,酶的含量也千差萬別,從而導致唾液中的病原體半衰期長短不一,對于非洲豬瘟病毒來說,長者 2~3 天,短者 1~2 小時不等。病原半衰期的存在是導致唾液學非洲豬瘟病毒漏檢率稍高的重要因素之一。因此采集完唾液要及時冰凍保存,并在三小時內完成檢測。

              三、環境、人員采樣

              對于未發病豬場,及時了解生產生活區、周邊環境、裝豬臺、盤豬場等地區消毒是否徹底,有沒受到非洲豬瘟威脅?豬場更換養豬工人,管理人員進出豬場,是否帶毒?豬場想要復養,但豬欄內非洲豬瘟病毒情況如何?因此豬場環境、人員采樣檢測顯得尤為重要。

              1、采樣工具準備:在采樣管內添加1ml無菌生理鹽水,準備無菌棉簽;

              2、豬場環境采樣:將無菌棉簽在豬場環境表面進行擦拭,放入生理鹽水中洗脫待檢;

              3、人員采樣:將無菌棉簽潤濕生理鹽水后在身體表面耳朵、頭發、鼻孔、手指等進行擦拭;

              環境樣本推薦使用商品化的核酸提取試劑盒提取樣本DNA進行PCR檢測。按照提取試劑盒說明書操作步驟提取。

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